Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒三种定量检测方法的比较与评价
为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、 免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase mono-layer assay,IPMA)和间接免疫荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)三种方法来对GCRV-Ⅱ进行检测和含量测定,从特异性、 敏感性、 可靠性和检测结果的相关性来比较这三种方法对于GCRV-Ⅱ定量检测的差异.结果显示:qPCR、IPMA和IFA三种方法检测GCRV-Ⅱ的最低限分别为8.6、86和86拷贝/μL,qPCR的检测灵敏度比IPMA和IFA高一个数量级;特异性分析表明,qPCR、IPMA和IFA三种方法均只能检测出GCRV-Ⅱ型分离株,而其它病毒和未感染病毒的阴性对照细胞均为检测阴性,表明这三种方法均具有较高的特异性;3种方法分别检测60份已知临床样品,qPCR、IPMA和IFA的诊断敏感性和特异性分别为96.7％(29/30)和100％(30/30)、100％(30/30)和93.3％(28/30)及100％(30/30)和100％(30/30);三种方法对于GCRV-Ⅱ的定量检测结果中病毒拷贝数和病毒滴度之间具有较好的相关性,其拟合曲线分别为:Y(IPMA,TCID50/mL)=23.629X-536174(qPCR,拷贝/mL)(R2=0.996)、Y(IFA,TCID50/mL)=20.318X-575062(qPCR,拷贝/mL)(R2=0.995)和Y(IPMA,TCID50/mL)=1.161X-1176(IFA,TCID50/mL)(R2=0.999).结果表明,GCRV-Ⅱ病毒滴度的测定,除了用IPMA和IFA外,也可以采用qPCR方法通过测定病毒的核酸拷贝数来测算其病毒滴度.
草鱼呼肠孤病毒、荧光定量PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验、间接免疫荧光试验、病毒滴度
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S941.41(水产保护学)
广东省自然科学基金重点项目2017B030311018;广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金2019KJ119;大宗淡水鱼产业技术体系CARS-45-17;Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒灭活疫苗规模化生产关键技术研究2019ZD0703;广东省促进经济高质量发展专项资金海洋经济发展项目GDOE[2019]A36
2019-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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