传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用

摘要：

实验建立了一套反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),用于实验室及现场检测鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV).针对IHNV的核蛋白基因设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶及Bst DNA聚合酶的作用下进行反转录LAMP,结果阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本仍为红棕色.反应条件优化结果表明最适反应温度为64℃;特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、HRV、VHSV和H2 O均不发生反应;敏感性试验表明该LAMP方法可检出浓度为1.0×10-4μg/μL的IHNV核酸.本研究所建立的IHNV反转录LAMP检测法成本低、 操作简单、 反应迅速、 不依赖专门的仪器,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合IHNV的现场检测和大批量样品的检疫.

关键词：传染性造血器官坏死病毒、鲑鳟、环介导等温扩增、核蛋白基因

所属期刊栏目：49

分类号：S941.41(水产保护学)

资助基金：北京市农业局农业科技项目20180134;北京市鲟鱼鲑鳟鱼创新团队项目BAIC08-2017

在线出版日期：2019-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：66-70