翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析

摘要：

超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶.本研究根据翘嘴鳜(Sini-perca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(GenBank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒pET-30a+ScCu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达.经过优化表达条件得到可溶的ScCu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性.结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc-Cu/Zn-SOD的表达.37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在.降低诱导温度和补充Cu2+/Zn2+可提高rScCu/Zn-SOD的表达量.在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO4和0.1 mmol/L ZnCl2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高.纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/mL,酶活力为108.5 U/mg.rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂.本结果可以为研究SOD蛋白特性和功能提供基础资料.

关键词：翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)、铜锌超氧化物歧化酶、原核表达、蛋白特性

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分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：南昌市科技支撑计划项目2012-KJ2C-NY-SC-002;国家自然基金31472305,31460697,21467015;江西省教育厅项目GJJ12024,GJJ10378;江西省自然科学基金20132BAB204019

在线出版日期：2017-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：11-17