斑点叉尾NK-lysin成熟肽在毕赤酵母中的表达

摘要：

NK-lysin是毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的具有抗菌作用的多肽,在机体免疫系统中发挥重要作用,被认为是抗生素的理想替代品。 NK-lysin的生物学功能主要由其成熟肽( mNK-lysin)决定。本文在已有斑点叉尾(Ictalurus punctatus) NK-lysin成熟肽原核重组表达载体pET-32a(+)-mNK-lysin的基础上,通过PCR在mNK-lysin的5’端和3’端分别添加EcoRI和XbaI酶切位点,并在3’端添加6× His标签以便于纯化；扩增到的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-mNK-lysin,转化至毕赤酵母X-33细胞中,通过博来霉素筛选以及对酵母转化子基因组的PCR鉴定得到高拷贝酵母转化子；在29℃,250 rpm,采用0．5%甲醇进行诱导表达；表达产物经固化金属离子亲和层析( IMAC)获得纯化的重组体mNK-lysin。经Tricine-SDS-PAGE分析,其分子量约为11．5 kD；经Western blot分析,证明mNK-lysin在毕赤酵母中成功表达。

关键词：斑点叉尾 (Ictalurus punctatus)、NK-lysin成熟肽、毕赤酵母、重组DNA表达

所属期刊栏目：47

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海市教育委员会产学研项目15CXY30;农业部都市农业南方重点实验室开放基金UA201307

在线出版日期：2017-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：78-83