鲤疱疹病毒II型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法

摘要：

根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus II,CyHV-2)ORF 4基因序列(GenBank：JQ815364．1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1041 bp,将其克隆至原核表达载体pET-32a (+)中,构建了重组原核表达载体pET-32a-ORF 4。将pET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体, ELISA检测抗体效价大于1∶50000, Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明：该多克隆抗体可与由CyHV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞( GICB)发生特异性的结合。

关键词：鲤疱疹病毒II型、ORF 4、原核表达、多克隆抗体、免疫荧光检测

所属期刊栏目：47

分类号：S941.41(水产保护学)

资助基金：国家“现代农业产业技术体系建设专项资金”nycytx-46-11;中国水产科学研究院基本科研业务费专项课题2016HY-200501;武汉市科技计划项目2016020101010083

在线出版日期：2017-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：61-65