达氏鲟精巢细胞消化分离和超低温冷冻保存

摘要：

通过研究两种酶对精巢细胞的消化效果，探究抗冻剂、降温程序、糖类和卵磷脂对达氏鲟( Acipenser dab-ryanus)精巢细胞冻存效果的影响，获得消化冻存后高存活率的细胞。实验使用0．25%胰蛋白酶和2 mg/mL胶原酶 H+500 U/mL中性酶II的组合酶对达氏鲟精巢细胞进行消化，获得不同消化时间内的活细胞数量。另外，还研究了冷冻稀释液中分别添加10%二甲基亚砜( DMSO)、乙二醇( EG)、甲醇( MET)作为抗冻剂，采用-1℃/min慢速降温以及直接投入液氮中的快速降温方法冻存，冷冻稀释液采用D-海藻糖或同浓度D-蔗糖，以及添加5%、8%、11%卵磷脂对冻存效果的影响。结果显示：两种消化酶在同一时间消化所得的活细胞数和活细胞率无显著差异，并且都在3 h获得最多活细胞。慢速降温的冻存效果极显著地好于快速降温( P=0．01)。不同抗冻剂的保存效果差异显著，复苏后细胞相对存活率 EG (51．70%±5．24%)>MET (45．09%±3．15%)>DMSO (40．18%±3．90%)。不同糖对达氏鲟精巢细胞冻存效果无显著影响；不同浓度的卵磷脂冻存效果有极显著差异。含8%卵磷脂的冻存液对细胞的冻存效果最好，细胞存活率可达(93．55±2．56)%，培养10 d后细胞数目为0 d时的3．19倍。

关键词：达氏鲟(Acipenser dabryanus)、胰蛋白酶、冷冻保存、抗冻剂、卵磷脂

所属期刊栏目：46

分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费2015B02YQ01;公益性行业农业科研专项201203086;国家自然基金青年项目31402301

在线出版日期：2016-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：19-24