嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因的原核表达及免疫保护性研究

摘要：

为评价嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)PDK06株外膜蛋白A(ompA)的原核表达产物是否具有抗原性及其对斑点叉尾 ( Ictalurus punctatus)的免疫保护力, 根据GenBank上嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因序列(GenBank登录号: AF146597)设计去信号肽引物, 扩增获得一段约1 000 bp的序列, 经鉴定正确后, 构建重组表达质粒pET-32a( +) -pompA; 然后将该质粒转入BL21 (DE3)后用IPTG诱导表达, 经纯化后得到pompA重组蛋白; 最后将pompAompA蛋白与弗氏不完全佐剂( FIA)混合免疫斑点叉尾 , 评价其免疫效果. 结果显示:克隆的嗜水气单胞菌pompA基因全长为960 bp, 编码319个氨基酸, 融合表达的重组蛋白相对分子质量约为53, 670 kDa;FIA能够提高斑点叉尾 的溶菌酶活性、 ACH50活性、 头肾巨噬细胞呼吸暴发活性; pompA组抗体水平在第4周达到峰值, FIA免疫组抗体水平在第5周达到峰值, 且FIA能够显著提高斑点叉尾 的抗体水平; 攻毒后各组累计死亡率分别为93. 33%( PBS)、 93. 33%( FIA)、 50. 00%( pompA)和13. 33%( FIA+pompA) , pompA和FIA+pompA组相对保护率分别为46. 43%和85. 71%; 免疫组靶器官中的细菌数量显著低于对照组, 且FIA+pompA细菌含量最低. 说明pompA可以作为一个亚单位疫苗候选疫苗, 而FIA佐剂能较好的增强亚单位疫苗的免疫效果.

关键词：嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、ompA、亚单位疫苗、斑点叉尾(Ictaluruspunctatus)、免疫效果

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分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：中央高校基本科研业务费XDJK2014C056;中国长江三峡集团公司科研项目CT-12-08-01

在线出版日期：2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3-10,28