大鳞副泥鳅β-actin 基因近端启动子的克隆及启动活性分析

摘要：

采用PCR 技术从大鳞副泥鳅（ Paramisgurnus dabryanus ）基因组中克隆了β-actin 基因近端启动子片段DPRK1，并将该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP-N1中，构建了重组荧光表达载体pDPRK1-EGFP。将该载体分别转染真核细胞293T、 CEL及DF1，检测绿色荧光表达情况。重组载体经NdeⅠ酶切线性化后，显微注射到斑马鱼（ Danio rerio）的受精卵中。序列分析显示该片段的长度为1282 bp，含167 bp的5′侧翼序列近端启动子区和共1115 bp的第1个外显子以及第1个内含子区。5′侧翼序列近端启动子含有CAAT box， CArG motif和TATA box，分别位于转录起始位点（＋1）上游的-94、-64和-31处。在将重组载体pDPRK1-EGFP转染293 T、 CEL及DF1的实验中观察到3种细胞都有很强的绿色荧光，在显微注射到斑马鱼受精卵的实验中也观察到绿色荧光，该结果表明大鳞副泥鳅β-actin基因近端启动子片段DPRK1具有效的启动功能，为下一步创制转基因泥鳅新品系提供了技术支撑。

关键词：大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)、β-actin、启动子、绿色荧光蛋白、显微注射

分类号：S917.4(水产基础科学)

在线出版日期：2014-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：18-24