草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白在毕赤酵母中表达的初步研究

摘要：

根据GeneBank中草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)104株VP6蛋白的全基因序列(HM234682)设计一对特异引物,以提取的GCRV-104核酸为模板,采用RT-PCR技术扩增VP6蛋白编码基因,并将其克隆到含强启动子AOXI的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZB上.重组酵母质粒pPICZB-VP6经Sac I线性化,电击转化到毕赤酵母KM71菌株中,Zeocin抗性平板上筛选高拷贝转化子.阳性转化子在30℃,0.5％ (V/V)的甲醇添加量的条件下,连续诱导3d,表达产物经SDS-PAGE和Western-Blotting检测,结果表明成功实现了GCRV-104 VP6蛋白在毕赤酵母中的胞内表达,重组VP6蛋白相对分子质量约46000,与天然VP6蛋白相对分子质量接近,并且可与鼠抗草鱼GCRV-104VP6蛋白的多克隆抗体特异性结合.

关键词：草鱼呼肠孤病毒、VP6蛋白、毕赤酵母(Pichia pastoris)、表达分析

所属期刊栏目：42

分类号：S943.112·41+1(水产保护学)

资助基金：国家现代农业产业技术体系建设专项资金CARS-46-11

在线出版日期：2013-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：38-42