稳定表达丙型肝炎病毒复合多表位基因P815细胞克隆的建立

摘要：

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体,获得重组质粒稳定转染的P815细胞克隆. 方法:PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCV E2区模拟表位和NS3～NS5七个T细胞表位基因Em;分别克隆入穿梭质粒载体pDE22中. 用BamHⅠ/HindⅢ双酶切pDE22得到复合多表位基因CtEm,再将CtEm亚克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-),构建重组质粒pCDNA3.1(-)-CtEm,经酶切鉴定及测序正确后,通过脂质体转染至P815细胞,持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系,用RT-PCR,IFA,Western-blot证实该稳定转染细胞系可以表达多表位基因. 结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,建立了稳定转染的P815细胞系. 结论:构建HCV多表位基因的真核表达载体,稳定转染P815细胞,为进一步在疫苗研究中分析 CTL功能建立了靶细胞.

关键词：丙型肝炎病毒、表位、真核表达、转染

所属期刊栏目：27

分类号：R392.7

资助基金：中国科学院资助项目30371280

在线出版日期：2006-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：38-41