SiRNA真核表达载体阻断HeLa细胞stathmin基因表达研究

摘要：

目的: 构建人stathmin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对HeLa细胞中stathmin基因表达的干涉作用. 方法: 将合成的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体,酶切及测序鉴定. 脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选后RT-PCR检测其对stathmin基因mRNA的干涉效果. 结果: 经酶切及测序鉴定,成功构建siRNA真核表达载体. 经脂质体转染HeLa细胞后,RT-PCR显示所构建的干涉stathmin基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,HeLa细胞中stathmin基因的mRNA表达水平明显降低. 结论: 成功构建了人stathmin基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-S1和pSilencer-S2,并在HeLa细胞中有效地发挥了对stathmin基因表达的干涉作用.

关键词：stathmin、RNA、小分子干扰、真核表达载体、HeLa细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R730.59(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目30371445;陕西省科技攻关项目2003K10G44

在线出版日期：2006-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2223-2225