人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化

摘要：

目的:建立和优化骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定. 方法:采用体外分离培养的MMSCs为研究对象,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导,观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性,应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达,建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件. 结果:未进行诱导的对照组细胞保持长梭型,形状因子4.5±1.0,面积较小,增生较快,呈典型成纤维细胞的漩涡状或火焰状生长,培养后期可见5～7个分支,无细胞变圆,双核细胞率小于0.1%,逐渐老化,颗粒增多. 组化染色未见表达ALB和CK18. 所有诱导组细胞在培养中细胞分支均减少,多为1～3个分支,未用基质的细胞仍保持长梭形生长,给予基质的诱导细胞部分形态由长变圆,形状因子下降,给予5-氮胞苷(5-azacitidine, AZA)预处理可抑制细胞过度增生,细胞形态由长梭型逐渐变短,PDGF-BB预处理对细胞增生无明显抑制作用,细胞容易出现分支. 诱导各组组化染色显示,第21日时均有ALB和CK18阳性表达. 诱导2组～诱导5组的细胞转圆率、双核细胞比率及ALB,CK18阳性细胞比例均显著高于对照组及诱导1组(P<0.05). 结论:在无血清培养条件下,按诱导4组的方案10 g/L Matrigel作基质,2.5 mmol/L AZA预处理10～12 h,HGF 10 μg/L+FGF4 10 μg/L+HGM培养基可获得高比例的类肝细胞.

关键词：骨髓间充质干细胞、类肝细胞、细胞分化、诱导

所属期刊栏目：25

分类号：R392.12

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA216161

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1939-1943