重组胸腺素α1的分离纯化和活性测定

摘要：

目的　利用融合表达载体pThioHisA的重组质粒pThioHisA-Tα1④， 转化大肠杆菌TOP10得到的工程菌，来分离纯化表达的胸腺素α1（thymosin alpha 1，T α1）. 方法　将高效表达融合蛋白 的工程菌用细胞破碎器裂解，经80℃热处理，离心上清采用Q-Sepharose FF阴离子交换色谱纯化融合蛋白. 融合蛋白经CNBr裂 解后用常压离子交换色谱纯化Tα1单体. 应用SDS-PAGE，2L-Tricine-SDS-PAGE和HPLC进行鉴定. 结果　[ HTSS SDS-PAGE分析表明菌体表达的融合蛋白占菌体总蛋白的400 g*kg-1. 经2L-Tricine-SDS-PAGE分析证实,融合蛋白可裂 解出Tα1单体，裂解物经简单的离子色谱可以纯化出Tα1单体，HPLC鉴定纯化出的Tα1纯度可达950 g*kg-1以上. 利用3H-TdR进行的生物活性测定表明，在致有丝分裂原ConA存在的条件下，融合蛋白和Tα1单体均具有刺激小鼠脾淋巴细胞 分裂增殖的能力，与化学合成的Tα1相比具有相似的生物活性. 结论　该方法是分离纯化Tα1 简便易行，经济有效的方法；同时也为Tα1的分离纯化和大规模的开发生产奠定了基础.

关键词：胸腺素α1、融合表达、蛋白质纯化、生物活性

所属期刊栏目：22

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：395-398