沉默调节蛋白3通过mTOR信号途径调节溶酶体功能抑制U87细胞凋亡

摘要：

目的 探讨沉默调节蛋白3(sirtuin3,Sirt3)在胶质瘤细胞U87中的作用,为胶质瘤的早期诊治提供新靶点.方法 基于中国脑胶质瘤数据库(CGGA)、GEPIA2数据库,通过生物信息学分析Sirt3在胶质瘤不同分级的表达情况,通过Western blot检测6位胶质瘤患者癌旁与肿瘤组织中Sirt3的蛋白水平.利用shRNA慢病毒、CRISPR/Cas9系统干预U87细胞Sirt3的表达,采用TUNEL染色、PI-Annexin V双荧光标记检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-caspase3及LAMP1、LAMP2、LAMP2A、TFEB、mTOR等蛋白的表达.利用mTOR小分子抑制剂Rapamycin处理Sirt3敲减U87细胞,检测相关蛋白及细胞凋亡的变化.对Sirt3敲除前后的U87细胞进行核质分离实验,并检测p-TFEB蛋白表达的变化.在敲减及敲除Sirt3的U87细胞中分别过表达TFEB及Sirt3后,检测溶酶体膜蛋白表达的变化情况.结果 Sirt3在高级别胶质瘤中高表达,且与患者的低生存率密切相关.敲减Sirt3表达后细胞凋亡增加(P＜0.01),溶酶体膜蛋白LAMP1、LAMP2、LAMP2A显著下调(P＜0.01),p-mTOR显著增加(P＜0.01),通过核质分离实验发现敲除Sirt3后p-TFEB在胞质中增加(P＜0.01).在Sirt3敲除组过表达Sirt3后,LAMP1、LAMP2蛋白水平恢复,且溶酶体数量显著增加(P＜0.01);在Sirt3敲减组过表达TFEB后,LAMPs蛋白表达明显上调(P＜0.01).结论 Sirt3可能通过调控mTOR信号通路影响TFEB的核质分布,上调溶酶体膜蛋白LAMPs表达增强胶质瘤细胞溶酶体功能,进而促进胶质瘤细胞存活和恶性增殖,提示Sirt3可能是胶质瘤临床诊断和进展的分子标志物.

关键词：沉默调节蛋白Sirt3、胶质瘤、凋亡、溶酶体、雷帕霉素靶蛋白、转录因子EB

所属期刊栏目：45

分类号：R394.3;R730.23;R739.41

在线出版日期：2023-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1916-1926