川芎嗪通过调控NRF2/HO-1途径抑制高糖诱导的中性粒细胞外捕获网形成

摘要：

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对高糖诱导的中性粒细胞外捕获网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响及机制.方法 运用CCK-8检测不同浓度(0、5、10、20、40、80 μmol/L)的TMP处理4h后中性粒细胞的活性.将中性粒细胞分为7组:Control组(1.5 g/L葡萄糖)、TMP 组(40 μmol/L TMP)、HG 组(4.5 g/L 葡萄糖)、HG+TMP 组(40 μmol/L TMP+4.5 g/L 葡萄糖)、HG+TMP+ML385 组(4.5 g/L 葡萄糖+40 μmol/L TMP+10 μmol/L ML385)、HG+ML385 组(4.5 g/L 葡萄糖+10 μmol/LML385)和HG+DPI组(4.5 g/L 葡萄糖+10 μmol/L DPI).通过免疫荧光观察NETs的结构;运用DHE和DCFH-DA检测中性粒细胞内ROS和超氧化物阴离子的表达量;采用ELISA试剂盒检测培养基中MPO-DNA的含量,Pico-Green kit试剂盒检测培养基中dsDNA含量,Western blot检测细胞内H3-cit、NRF2、HO-1、NOX2等的表达,评估TMP对NRF2信号级联的调控作用.结果 80 μmol/L的TMP会降低中性粒细胞活性(P＜0.01),其余浓度的TMP对中性粒细胞活性无显著影响.与Control组比较,TMP组中性粒细胞NRF2、HO-1表达明显上升(P＜0.01).与HG组比较,HG+TMP组中性粒细胞产生的H3-cit表达显著降低(P＜0.05),并且培养基中dsDNA和MPO-DNA含量明显下降(P＜0.01).免疫荧光未观察到HG+TMP组中NETs形成;HG+TMP组中性粒细胞产生的ROS和超氧化物阴离子较HG组中性粒细胞显著降低(P＜0.01).使用NRF2抑制剂ML385处理后,TMP对H3-cit、NRF2和HO-1的作用被逆转;培养基中dsDNA和MPO-DNA含量明显上升(P＜0.01),并且胞内ROS和超氧化物阴离子相较HG+TMP组的中性粒细胞显著升高(P＜0.01).结论 TMP可以激活NRF2/HO-1通路并抑制ROS的形成,从而抑制高糖诱导的中性粒细胞外捕获网形成.

关键词：川芎嗪、中性粒细胞、中性粒细胞外捕获网、活性氧、高糖、NRF2/HO-1

所属期刊栏目：44

分类号：R285.5;R331.144;R392.12(中药学)

在线出版日期：2023-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2157-2164