高糖及巨噬细胞共培养对成骨细胞氧化应激及自噬的影响

摘要：

目的 探讨在高糖环境下,与巨噬细胞Raw264.7共培养的成骨细胞MC3T3-E1氧化应激、自噬及细胞凋亡的变化.方法 ①根据培养基的葡萄糖浓度将Raw264.7细胞分为25、30、35 mmol/L 3 组,流式细胞术检测细胞 CD86 表达;RT-qPCR 检测IL-6、TNF-α、iNOS、NOX2、p47phox 的mRNA表达水平,Western blot检测iNOS的蛋白表达水平,DCFH-DA探针检测ROS水平.②MC3T3-E1细胞分为正常糖单独培养组(5.5 mmol/L葡萄糖浓度,5.5-Mono组)、高糖单独培养组(35 mmol/L葡萄糖浓度,35-Mono组)和高糖共培养组(与Raw264.7细胞共培养24 h,35-Co组)3组,DCFH-DA探针检测MC3T3-E1细胞ROS水平;透射电镜、Western blot检测MC3T3-E1细胞自噬水平;流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡水平.结果 高糖下Raw264.7细胞表面标志CD86表达增加,与25 mmol/L组相比,35 mmol/L组IL-6、TNF-α、iNOS的mRNA表达水平显著增加(P＜0.05),iNOS蛋白表达水平显著增加(P＜0.05),ROS水平增加,NOX2、p47phox的mRNA表达水平显著增加(P＜0.05);与5.5-Mono组相比,35-Mono、35-Co 组MC3T3-E1细胞ROS均增加且35-Co组增加更明显,透射电镜显示35-Co组自噬溶酶体数量明显增加,35-Co组MC3T3-E1细胞中LC3-Ⅱ及SQSTM1/p62的蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),35-Co组的MC3T3-E1细胞凋亡率较35-Mono组明显升高(P＜0.05).结论 与高糖下M1向极化的Raw264.7细胞共培养会诱导MC3T3-E1细胞凋亡,该作用可能与MC3T3-E1细胞胞内ROS增加和自噬过强有关.

关键词：高血糖、巨噬细胞极化、共培养、氧化应激、细胞自噬

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分类号：R322.71;R329.25;R363.272(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金;重庆英才计划;重庆市自然科学基金

在线出版日期：2022-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1809-1818