10.16016/j.1000-5404.201912296
LINC01006对肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及其机制
目的 探讨长链非编码RNA LINC01006对肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及分子机制.方法 通过实时定量PCR检测肾母细胞瘤组织、细胞系中LINC01006的表达.在人肾母细胞瘤细胞中转染LINC01006的腺病毒过表达载体和siRNA,分别采用CCK-8、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)细胞增殖检测试剂盒、Transwell侵袭实验、流式细胞术检测细胞活力、增殖、侵袭及凋亡能力的变化.通过生物信息学分析预测LINC01006的靶基因,双荧光素酶报告基因分析验证预测结果;检测过表达和敲低LINC01006后miR-148a-3p及其靶基因中胚层同源盒基因(mesoderm homoobox2,MEOX2)表达水平的变化.随后,分别在裸鼠皮下注射转染腺病毒空载体和LINC01006过表达载体的肾母细胞瘤细胞系,建立小鼠移植瘤模型,测定移植瘤的体积及质量,以及肿瘤组织中LINC01006、miR-148a-3p、MEOX2和磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated-phosphatidylinositol-3 kinase,p-PI3K)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶,即蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)的表达.结果 肾母细胞瘤组织和细胞系中LINC01006的表达水平显著低于对照组织和细胞(P＜0.01).LINC01006可抑制肾母细胞瘤细胞的活力(P＜0.01)、体外增殖能力(P＜0.01)和侵袭能力[(166.00±13.75) vs (103.00±9.24),P＜0.05],促进细胞凋亡[(11.30±0.24) vs (37.25±1.57),P＜0.01].双荧光素酶报告基因实验证实LINC01006与miR-148a-3p直接结合,而MEOX2是miR-148a-3p的靶基因.过表达LINC01006抑制了miR-148a-3p的表达[(1.07±0.02)vs (0.32±0.03),P＜0.01],而抑制miR-148a-3p的表达促进了MEOX2 mRNA和蛋白水平的表达(P＜0.01),进而抑制了PI3K/Akt信号通路的活性(P＜0.05).与转染pcDNA-LINC01006组相比,共转染LINC01006和miR-148a-3p mimic组中MEOX2的表达下调(P＜0.01),促进了PI3K/Akt信号通路的活性(P＜0.01),细胞活力、增殖和侵袭能力均显著提高(P＜0.01),细胞凋亡能力降低(P＜0.01).此外,过表达LINC01006抑制了裸鼠移植瘤的生长(P＜0.01).结论 LINC01006可直接与miR-148a-3相互作用并下调其表达水平,从而阻断MEOX2/PI3K/Akt通路的活性,抑制肾母细胞瘤细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡,抑制肿瘤的生长.
肾母细胞瘤、LINC01006、miR-148a-3p、MEOX2/PI3K/Akt通路、增殖与侵袭、凋亡
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R394.3;R730.23;R737.11
2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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