胎盘间充质干细胞外泌体对高糖培养的成纤维细胞衰老的影响

摘要：

目的 探索高糖(high glucose,HG)促进体外培养的人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)的衰老条件,建立高糖老化模型;观察胎盘间充质干细胞来源的外泌体(exosomes,Exos)对高糖培养的成纤维细胞增殖、迁移及衰老的影响.方法 分离人包皮组织的HDFs.实验分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG1组(26 mmol/L葡萄糖)、HG2组(35 mmol/L葡萄糖).CCK-8试剂盒检测各组细胞在1、3、5、7d的增殖情况;各组培养7d后进行划痕实验,观察各组HDFs在24h内的迁移率;2',7'二氯荧光素二醋酸(DCFH)法检测各组培养7d后细胞内活性氧簇(ROS)水平;细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测各组培养7d后β-半乳糖苷酶活性.体外培养胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells,PMSCs),差速高速离心法分离Exos.将上述培养的HDFs分为3组:HG2组(35 mmol/L葡萄糖)、HG2+低浓度Exos(5μg/mL)组、HG2+高浓度Exos(50 μg/mL)组,培养3d后,检测细胞增殖情况、迁移率、ROS水平和β-半乳糖苷酶活性;流式细胞术检测细胞周期;Western blot分析衰老相关蛋白p53和p21表达情况.结果 与对照组相比,HG1和HG2组培养的HDFs增殖、迁移能力明显下降(P＜0.01),ROS水平显著升高(P＜0.01),β-半乳糖苷酶活性显著增加(P＜0.01),而且各指标尤其以HG2组变化最为明显;Exos实验结果显示:高浓度Exos明显促进高糖培养HDFs的增殖和迁移(P＜0.01),显著降低细胞内的ROS水平和β-半乳糖苷酶活性(P＜0.01),同时使细胞内p53和p21蛋白的表达水平显著下降(P＜0.01),而低浓度Exos无明显效果.结论 胎盘间充质干细胞来源的Exos促进高糖培养的HDFs增殖、迁移,缓解细胞的氧化应激损伤和衰老状态,其机制可能与衰老相关蛋白p53和p21表达下调有关.

关键词：外泌体、胎盘间充质干细胞、成纤维细胞、高糖、细胞衰老、细胞增殖、细胞迁移

所属期刊栏目：42

分类号：R322.99;R329.28;R587.102(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金重点项目;国家重点研发计划

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1163-1173