过表达Notch配体Delta-like基因的MLO-Y4骨细胞株的建立及其对骨髓基质细胞成骨分化的作用

摘要：

目的 建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响.方法 用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分别稳定表达Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株.采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)对筛选出来的MLO-Y4骨细胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表达进行鉴定.将3种细胞株分别与野生型小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行共培养,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量检测共培养3dALP活性变化;qPCR检测共培养3d成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达水平,在使用Notch信号抑制剂DAPT后检测上述指标.结果 与阴性对照组相比,Dll1、Dll3及Dll4转染组中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平显著增加(P＜0.05).共培养3d后,骨细胞中Dll4基因的过表达促进了BMSC的ALP活性,与阴性对照组相比有统计学差异(P＜0.05).qPCR结果显示,MLO-Y4-Dll4组的ALP、Runx2、OPN及Collagen Ⅰ成骨相关标志基因的表达均有所升高(P＜0.05),Notch信号靶基因Hey1、HeyL、Hes1及Hes7的表达也有所升高(P＜0.05).而在加入DAPT后,MLO-Y4-Dll4组的ALP活性下降,成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达有所下降(P＜0.05).结论 建立了稳定表达外源Dll1、Dll3或Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,在骨细胞中过表达Dll4能促进骨髓基质细胞的早期成骨分化,经典Notch信号通路在其中可能发挥了重要作用.

关键词：慢病毒、Delta-like基因、过表达、小鼠骨样细胞、骨髓基质细胞、成骨分化、DAPT

所属期刊栏目：42

分类号：R322.71;R329.2;R394-33(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金-广东联合基金项目U1601220

在线出版日期：2020-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：899-907