骨髓间充质干细胞源外泌体调控心肌微血管内皮细胞增殖的机制研究

摘要：

目的 探讨缺氧预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体(exosomes)调控心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVECs)增殖的机制.方法 采用酶消化法联合差速贴壁法培养大鼠CMVECs,超高速离心法提取常氧及缺氧预处理的BMSCs exosomes,免疫荧光检测CMVECs内化exosomes情况.实验分为4组(n=3):①正常对照组(Control),②去除exosomes后的BMSCs条件培养基的空白对照组(Free-Exos),③常氧外泌体组(Nor-Exos),④缺氧外泌体组(Hypoxia-Exos,外泌体浓度为400 μg/μL,与CMVECs共培养24 h).采用Edu法及流式细胞术细胞周期法检测细胞增殖能力,qRT-PCR检测exosomes和CMVECs各组中miR-214表达变化.抑制exosomes中miR-214后,qRT-PCR检测exosomes及CMVECs中miR-214的表达变化,并观察细胞增殖情况.结果 经透射电镜及免疫印迹法验证提取的囊泡状物质为外泌体,并通过免疫荧光分析发现DiI标记的exosomes可被CMVECs内化;Edu及细胞周期结果显示,Hypoxia-Exos组较Nor-Exos组具有更强的促CMVECs增殖能力(P＜0.05).qRT-PCR结果显示,与Nor-Exos组比较,Hypoxic-Exos组中miR-214表达显著升高(P＜0.05).下调Hypoxia-Exos中的miR-214表达后,Edu及细胞周期结果显示Hypoxia-Exos组的促进细胞增殖能力被部分阻断(P＜0.05).结论 缺氧预处理骨髓间充质干细胞源exosomes可能通过传递miR-214促进CMVECs增殖效应.

关键词：骨髓间充质干细胞、外泌体、心肌微血管内皮细胞、细胞增殖、细胞分化

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分类号：R322.11;R329.21;R329.28(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金地区项目81760042,81860061;贵州省科技计划项目黔科合LH字[2017]7107号

在线出版日期：2020-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2313-2321