空肠弯曲菌PEB1的B细胞免疫优势表位的鉴定及保护效果的评价

摘要：

目的 利用表位预测分析技术筛选空肠弯曲菌(C.jejuni)黏附蛋白PEB1的B细胞免疫优势表位,并评价其免疫保护效果.方法 采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重叠肽段.ELISA系统筛选鉴定PEB1的B细胞免疫优势表位.采用KLH偶联免疫优势表位肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定优势表位肽诱导的IgG抗体效价.末次免疫后7d,经口灌胃感染C.jejuni 11168,在感染后的28 d,定量检测感染攻毒后各组小鼠的空肠组织C.jejuni的定植量以及qRT-PCR技术检测炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平.通过HL-60细胞调理吞噬实验测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬杀伤功能.免疫B细胞缺失小鼠,感染攻毒后检测肠组织C.jejuni的定植量.结果 PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB12u-228aa均能与PEB1抗血清产生强烈IgG抗体反应.抗PEB155-72aa、抗PEB197-114aa和PEB1211-228aa血清均能与重组的PEB1产生较强的抗原抗体反应.与CFA/IFA组相比,免疫PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa后血清中的抗体能够显著增强抗体介导的HL-60细胞的调理吞噬作用(P＜0.01),均显著降低C.jejuni在空肠组织中的定植量,同时也均显著降低炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平(P＜0.01).PEB155-72aa-KLH+CFA/IFA组,PEB197-114aa-KLH+CFA/IFA组,PEB1211-228aa-KLH+CFA/IFA组中,免疫B cell Knock out(B细胞缺失)小鼠攻毒后,C.jejuni在空肠组织中的定植量均显著高于WT(野生型)小鼠的定植量(P＜0.01).结论 成功鉴定出3个具有良好免疫原性和免疫保护作用的优势B细胞抗原表位(PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa),可用于C.jejuni疫苗的后续开发研究.

关键词：空肠弯曲菌、PEB1、表位肽、调理吞噬作用

所属期刊栏目：41

分类号：R378.99;R392-33;R392.13(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金31400128;全军医学科技青年培育计划项目孵化项目19QNP043

在线出版日期：2019-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：302-307