载LOX-1-siRNA靶向超声微泡的制备及其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用

摘要：

目的 构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1 (lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)-siRNA靶向超声微泡,研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用.方法 薄膜-水化-超声乳化法构建载LOX1-siRNA纳米级超声微泡(nanobubbles,NBs-siRNA).从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs).通过凝胶迁移阻滞实验与siRNA细胞内化实验验证超声微泡可运载siRNA进入靶细胞内;qRT-PCR及Western blot检测LOX1的mRNA和蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂质聚集情况.构建Wistar大鼠动脉硬化模型,实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-siRNA的NBs-siRNA微泡100 μg,并使用超声仪照射.治疗15 d后,取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度;免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况.结果 凝胶迁移阻滞实验结果显示,证实NBs与siRNA结合成功.激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导siRNA内化入VSMCs之中.qRT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.01).油红O染色显示实验组细胞泡沫化较oxLDL组减弱.组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻;免疫组化实验结果显示,实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低(P＜0.01).结论 成功制备能够有效运载LOX-1-siRNA的超声微泡,体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部,下调LOX-1表达,减少泡沫细胞形成,降低动脉硬化斑块病变的严重程度.

关键词：动脉硬化斑块、超声微泡、血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1、siRNA

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分类号：R543.5;R965;R981(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：广东省自然科学基金10151051501000016Supported by the Natural Science Foundation of Guangdong Province 10151051501000016

在线出版日期：2018-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2359-2365