三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2特异性人源肺癌噬菌体单链抗体的筛选和鉴定

摘要：

目的 通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库,并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体.方法 取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA,PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL,SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因scFv,克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,制备初级抗体库.以A549细胞及ABCG2蛋白对抗体库进行6轮淘选.Western blot检测单链抗体的可溶性表达和对ABCG2蛋白表达的影响,ELISA和ICC鉴定其特异性,CCK-8检测其顺铂增敏作用.结果 成功筛选出抗ABCG2人源肺腺癌噬菌体单链抗体.Western blot证实其可溶性表达,大小约为34×103且可明显下调ABCG2蛋白的表达.ELISA和ICC检测到该抗体对ABCG2抗原的识别率高达75％,并与A549细胞具有结合特异性.CCK8结果则显示该scFv可增加A549细胞对顺铂的敏感性,明显减小其IC50值.结论 成功构建了人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选出了能与ABCG2蛋白特异性结合的单链抗体,为后续体内可视化研究和靶向ABCG2+的肺癌干样细胞奠定基础.

关键词：噬菌体单链抗体scFv、肺腺癌、ABCG2、靶向治疗、化疗增敏

所属期刊栏目：37

分类号：R392-33;R392.11;R734.2

资助基金：国家自然科学基金81302018;重庆市卫生局医学科研项目2011-2-044

在线出版日期：2015-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2343-2347