miR-451对肺癌细胞的增殖抑制及其靶基因的初步鉴定

摘要：

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对非小细胞肺癌细胞增殖的作用及调控机制.方法 Lipofectamine 2000转染已构建成功的miR-451真核表达载体至非小细胞肺癌细胞A549,通过MTT检测肺癌细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,运用生物信息学技术对miR-451预测靶基因进行GO分析和KEGG信号途径分析,对炎症相关的预测靶基因PSMB8进行进一步的验证.构建含有PSMB8 3'UTR野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶检测A549细胞PSMB8表达水平,Western blot检测PSMB8和NOS2的表达情况.结果 MTT结果显示过表达miR-451能显著抑制A549细胞增殖.流式细胞术检测发现miR-451组细胞阻滞在G2期,而细胞凋亡未见明显差异.GO分析发现miR-451预测靶基因涉及PSMB8、CAB39、YWHAZ等17个基因,PSMB8主要参与细胞代谢调控,细胞周期与细胞增殖;KEGG信号途径分析结果显示靶基因主要涉及microRNA在细胞周期、PI3K-AKT、mTOR等信号通路.17个miR-451预测靶基因进行生物信息学研究发现PSMB8含有miR-451的结合位点,且在多个物种中呈高度保守.荧光素酶活性检测发现,过表达miR-451可抑制PSMB8荧光素酶活性表达.Western blot结果发现过表达miR-451的A549细胞PSMB8呈下调,而低表达miR-451的正常支气管上皮16HEB细胞PSMB8呈上调.Westem blot和细胞荧光免疫化学检测发现炎症因子NOS2在肺癌中表达也降低.结论 miR-451可能通过靶向炎症相关基因PSMB8/NOS2调控非小细胞肺癌细胞增殖,并参与肺癌的发生与发展.

关键词：肺癌、微小RNA、细胞增殖

所属期刊栏目：37

分类号：R394-33;R730.23;R734.2

资助基金：Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China 81270912 and the Project of Chongqing Commission of Science and Technology CSTC2013jcyjA10044.国家自然科学基金面上项目81270912;重庆市科委资助项目CSTC2013jcyjA10044

在线出版日期：2015-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1823-1829