腺病毒介导slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞对RF/6A细胞迁移及管腔形成的影响

摘要：

目的 观察共培养模型下,腺病毒介导的slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞(RPE)对猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移及管腔形成的影响.方法 用腺病毒介导的slit2基因(Ad-slit2)转染RPE细胞,同时设空载体腺病毒转染组(Ad-null)及空白对照组.转染24 h及48 h后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测RPE细胞中slit2、VEGF的mRNA及蛋白表达情况;ELISA法检测RPE细胞培养基上清液中VEGF的分泌水平;建立RPE&RF/6A共培养模型,采用Transwell小室法及Matrigel胶体外三维成型法分别检测过表达slit2基因的RPE细胞对RF/6A细胞迁移能力及管腔形成能力的影响,并计算迁移数目及管腔形成长度、管腔数.结果 Ad-slit2转染24、48 h后,RPE细胞在基因及蛋白水平表达slit2、VEGF均有明显增高;ELISA结果显示过表达slit2基因的RPE细胞其培养基上清液中分泌型VEGF水平增高;在RPE&RF/6A共培养下,空白对照组、Ad-null转染24 h组、Ad-slit2转染24 h组、Ad-null转染48 h组、Ad-slit2转染48 h组中,RF/6A细胞迁移数目分别是(40.6±4.5)、(36.7±3.5)、(67.7±4.2)、(36.0±3.6)、(79.7±3.5);管腔形成长度分别是(3.95±0.31)、(4.53 ±0.26)、(6.04±0.34)、(4.09 ±0.18)、(7.27±0.45) mm,管腔数分别是(8.7±3.2)、(8.9±3.6)、(15.9±4.2)、(8.3±2.4)、(23.3±4.5).Ad-slit2转染24 h及48 h组与空白对照组比较,差异具有统学意义(P＜0.05).结论 腺病毒介导的slit2基因转染RPE细胞可促进RF/6A细胞的迁移及管腔形成.RPE细胞中的slit2可能参与脉络膜新生血管形成过程.

关键词：slit2基因、脉络膜新生血管、脉络膜视网膜血管内皮细胞、迁移、管腔形成

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分类号：R322.91;R329.28;R394.2(人体形态学)

资助基金：Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China 81170858.国家自然科学基金面上项目81170858

在线出版日期：2016-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1619-1623