腺苷酸激活蛋白激酶激活参与促进慢性缺氧时心肌细胞存活

摘要：

目的 检测腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)在慢性缺氧心肌组织中的激活水平,探讨AMPK激活对慢性缺氧心肌细胞存活的影响及其意义.方法 选择本科2013年行手术矫治的先心病患儿24例,其中紫绀型先心病患儿12例,非紫绀型先心病患儿12例,取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本;选用4～6周龄清洁级雄性SD大鼠24只,分为常氧组和缺氧组(n=12).将缺氧组置入低压舱(模拟海拔5000m,气压405 mmHg),常氧组正常饲养.同时喂养28 d后,处死大鼠后迅速取出心脏并分离出右心室部分作为标本.采用Western blot分别检测p-AMPK在人体、大鼠缺氧心肌组织中的激活水平.选用H9c2心肌细胞株,并将其分为常氧组、低氧组、阻断组、激活组.将后3组细胞置入缺氧培养箱3 d (94％ N2,5％ CO2,1％ O2),建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型;常氧组置入细胞培养箱3d,对照培养.分别向阻断组和激活组中加入AMPK特异性阻断剂Compound C和激活剂AICAR,采用Western blot检测p-AMPK的表达,流式细胞仪、TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Hoechst33528染色观察细胞核形态、LDH测定心肌细胞死亡率.结果 Western blot结果显示与常氧组相比,缺氧心肌组织中p-AMPK/AMPK比值明显增高.与低氧组比较,AMPK阻断组凋亡细胞比例升高,TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);AMPK激活组与低氧组比较,凋亡细胞比例、TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均有降低(P＜0.05).结论 在慢性缺氧条件下,AMPK蛋白磷酸化水平增强,p-AMPK对心肌细胞慢性缺氧适应具有一定保护作用.

关键词：腺苷酸激活蛋白激酶、慢性缺氧、心肌细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R322.11;R345.57;R364.4(人体形态学)

资助基金：Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China 81270228.国家自然科学基金面上项目81270228

在线出版日期：2015-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：797-803