HBV人工转录因子与拉米夫定抗HBV作用的比较研究
目的 构建特异性结合乙型肝炎病毒X基因启动子(Hepatitis Bvirus X promoter,HBV Xp)的人工转录因子真核表达载体,并与拉米夫定(3TC)体外抗乙肝病毒效果进行比较研究.方法 利用Zine finger tools 3.0软件设计特异性结合HBV Xp的锌指蛋白(zinc finger protein,ZFP)并融合抑制性效应结构域kRAB,全基因合成后载入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-kRAB-Flag (ATF)、pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-Flag(ZFP1)、pcDNA3.1(+)-nls-kRAB-Flag(ZFP2),通过酶切、测序鉴定重组质粒的正确性,Western blot和细胞免疫荧光鉴定重组质粒在HepG2细胞表达情况.将重组质粒转染HepG2.2.15细胞,设空白组(Blank组)、ATF组、ZFP1组、ZFP2组、空质粒组(Emptyvector组)和拉米夫定组(3TC组),分别培养2、6、10 d,用Western blot、FQ-PCR、ELISA分别检测各组HBx蛋白、HBVDNA、上清中HBsAg和HBeAg的表达情况.结果 重组质粒成功构建且能在HepG2细胞中表达;ATF组抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBV DNA的表达,与其余各组相比差异有统计学意义(P＜0.05),且6d和10 d抑制作用强于2 d;3TC组亦能抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBV DNA的表达(P＜0.05).ATF组能抑制上清中HBsAg,HBeAg的分泌,与其余各组相比差异有统计学意义(P ＜0.05);3TC组亦能抑制上清中HBsAg,HBeAg的分泌(P＜0.05).结论 人工设计的特异性ATF在真核细胞中能正常表达,并能有效发挥抑制HBV的作用,且抑制作用强于拉米夫定.
锌指蛋白、人工转录因子、乙型肝炎病毒、X蛋白、HepG2.2.15细胞
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R373.21;R394.3;R966(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
Supported by the National Natural Science Foundation of China 81171562 and the Project of Science and Technology Plan of Yuzhong District,Chongqing 2011-1-010;国家自然科学基金81171562;重庆市渝中区科技计划项目2011-1-010
2015-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
2343-2348
