E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响
目的 构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响.方法 分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs.RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒.将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况.CCK-8(cell count kit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响.RT-PCR、Western blot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析.结果 分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs.克隆到2013 bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒.CCK-8法检测表明,与对照比较,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P ＜0.01);RT-PCR、Western blot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(P＜0.01).结论 分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达.
EPCs、E2-2基因、ID1基因、腺病毒
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R322.12;R.329.28;R394.2(人体形态学)
国家自然科学基金81270224;国家自然科学基金青年基金81000070;Supported by the National Natural Science Foundation of China81270224and the National Natural Science Foundation for Young Scholars of China 81000070.
2014-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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