PNPase调控线粒体microRNA对线粒体DNA的保护作用

摘要：

目的 探讨抑制PNPase表达对线粒体microRNA (MitomiRs)表达的影响以及对线粒体DNA的保护作用.方法 以人肝癌细胞SK-Hep1、HepG2和人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象,用带绿色荧光蛋白的(green fluorescent protein,GFP)PNPase shRNA慢病毒转染细胞,采用Western blot方法检测PNPase表达.分离细胞线粒体、提取线粒体RNA、micmRNA芯片检测下调PNPaise前后线粒体microRNA(MitomiRs)种类的变化;Q-PCR检测mtDNA损伤频率、ELISA方法检测线粒体8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG).结果 激光共聚焦显微镜观察显示,SK-Hep1、HepG2和U2OS细胞转染空载体病毒及PNPase shRNA慢病毒转染后12 ～24 h可见明显的绿色荧光.当MOI(转染复数)=20时,3种细胞的慢病毒转染效率达80％以上.连续观察2周,转染效率仍维持在70％～80％.Western blot检测结果显示PNPase shRNA组细胞PNPase蛋白表达低于正常对照组及阴性对照组.microRNA芯片显示:PNPaseshRNA后目的细胞MitomiRs表达谱发生明显变化,miR-30c-2-3p、miR-494、miR-1273g-3p、miR-4443表达上调,而miR-324-3p、miR-574-Sp、miR-371b-5p、miR-6068、miR-21-5p表达下调.Q-PCR检测显示PNPase shRNA组细胞mtDNA损伤频率减少.ELISA结果显示PNPase shRNA组线粒体8-OHdG含量下降.结论 抑制肿瘤细胞线粒体PNPase表达可导致MitomiRs表达谱发生变化,同时,肿瘤细胞mtDNA损伤减少,提示MitomiRs可能参与了mtDNA复制的调控.

关键词：PNPase、线粒体、MitomiRs、氧化损伤

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分类号：R394.3;R730.23;R735.7

资助基金：国家自然科学基金81101892;重庆市自然科学基金重点项目CSTC 2013C290;the National Natural Science Foundation of China81101892;the Key Program of Natural Science Foundation of ChongqingCSTC2013C290

在线出版日期：2014-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：780-784