人端粒酶逆转录酶启动子转录活性的磁共振成像研究
目的 探索磁共振成像技术检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子靶向转录活性的可行性.方法 构建慢病毒Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro和对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro载体,将上述载体分别转染端粒酶阳性的肺腺癌(A549)和端粒酶阴性的原代人牙周膜成纤维(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)细胞.进行免疫荧光染色和Western blot检测细胞Fth-flag表达情况,采用普鲁氏蓝铁染色检测细胞摄铁量,MR扫描观察细胞T2* WI信号和T2*值改变.结果 A549细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,免疫荧光染色和Western blot检测结果显示转染细胞表达Fth-flag蛋白,未转染细胞不表达Fth-flag蛋白,普鲁氏蓝铁染色示转染细胞摄铁量较未转染细胞显著增加,MR扫描显示转染细胞T2* WI信号(1 340.86±49.21)和T2*值(12.10 ±0.92)较未转染细胞(2 049.08±87.58),(21.44±1.15)显著降低(P＜0.05)；HPDLFs细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,细胞无Fthflag蛋白表达,细胞摄铁量较未转染细胞无变化,T2* WI信号(2 225.42±73.43)和T2*值(24.01 ±1.13)较未转染细胞T2* WI信号(2 148.48 ±54.74)和T2*值(23.39±1.72)无显著差异(P＞0.05).而转染对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro慢病毒载体后,A549和HPDLFs细胞均表达Fth-flag蛋白,转染细胞摄铁量较未转染细胞均显著增加,转染细胞T2* WI信号[A549:(1 137.38 ±60.59),HPDLFs:(1 299.16±53.42)]和T2*值[A549:(9.61±1.17),HPDLFs:(11.54±0.74)]均比未转染细胞显著下降(P＜0.05).结论 MR铁蛋白报告基因成像技术可用于检测hTERT启动子转录活性,构建的慢病毒载体有望为恶性肿瘤的靶向诊断提供一种新的方法.
磁共振成像、人端粒酶逆转录酶启动子、铁蛋白、报告基因
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R394-33;R394.3;R445.2
重庆市基础与前沿研究计划重点项目CSTC2013jjB10010 Supported by the Key Project of Basic and Cutting-edge Research Program of Chongqing CSTC2013jjB10010
2014-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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