利用滚环扩增技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因单碱基突变
目的 应用滚环扩增(rolling circle amplification)技术建立对结核分枝杆菌耐药基因单碱基突变的快速检测方法.方法 以结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因为研究对象,设计针对该基因常见突变位点的锁式探针.通过对突变型模板、野生型模板、非结核分枝杆菌基因序列模板及不同比例的突变型模板和野生型模板混合样本的检测,研究本实验方法的特异性和灵敏度.建立特异性地检测rpoB基因单碱基突变的滚环扩增方法.通过对临床样本的检测并与测序结果比较,评价该方法的临床应用价值.结果 通过优化反应条件,应用滚环扩增技术能特异性的检测出结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的单碱基突变.通过对含有不同比例突变型模板的混合样本检测,最低能检测出1％突变型/野生型模板的样本.80株临床样本的检测与测序结果一致.结论 滚环扩增技术特异性高、灵敏度高,无需特殊昂贵仪器且简单易操作,能够快速有效的检测出耐药结核的单碱基突变,是具有临床应用前景的方法.
滚环扩增、结核分枝杆菌、耐药、rpoB基因
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R378.911;R394-33;R446.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金81171667;重庆市科委攻关课题CSTC2011AC5033;国家质检总局项目2010IK212;深港创新圈计划联合资助项目ZYB200907090128A;深圳市科技计划HZ0907004;the National Natural Science Foundation of China81171667;the Tackling Project of Chongqing Committee of Science and TechnologyCSTC2011AC5033;the Project of General Administration of Quality Supervision,Inspection and Quarantine of the People's Republic of China2010IK212;the Hong Kong Innovation Circle Joint ProjectZYB200907090128A;the Shenzhen Science & Technology Planning ProgramHZ0907004
2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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