靶向P75的siRNA对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 构建P75特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促乳腺癌细胞生长及凋亡的影响.方法 通过GenBank提供的P75 mRNA序列,设计3对能转录短发夹状RNA的DNA序列,构建pSilencerTM4.1-CMV neo质粒重组载体,转染乳腺癌SKBR3细胞；通过实时荧光定量PCR和Western blot筛选RNA干扰效果最强的干扰片段；以此干扰片段转染至乳腺癌SKBR3细胞,利用G418筛选稳定表达P75-siRNA的SKBR3细胞株,命名为P75-siRNA；MTT检测P75干扰后NGF对细胞增殖作用的影响；流式细胞术检测细胞凋亡；建立荷乳腺癌小鼠模型,观察P75干扰后对小鼠肿瘤生长和凋亡相关蛋白表达的影响.结果 序列测定表明成功构建P75-siRNA表达载体,实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示P75 mRNA和蛋白表达下调,尤以P75 2-siRNA干扰片段效果显著；MTT检测显示,NGF能刺激细胞增殖,与NGF组相比,P75-siRNA干扰后细胞增殖率均明显增高(P＜0.05)；与空白对照组相比,NGF+ P75-siRNA组和NGF组的细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),NGF+ P75-siRNA组更为明显；荷乳腺瘤小鼠中,P75-siRNA组小鼠的肿瘤生长明显超过未转染组和空载体转染组(P＜0.05),且P75-siRNA组Caspase-3表达下降,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P＜0.05).结论 P75特异干扰表达载体能有效降低P75的表达,增强NGF促乳腺癌SKBR3细胞的增殖作用和抗凋亡作用,从而使肿瘤生长更为明显.
乳腺癌、P75、siRNA
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R394.2;R730.23;R737.9
the Natural Science Foundation of Anhui Provincial Department of EducationKJ2010B119;the Research Project of Bengbu Medical CollegeByky1205;安徽省教育厅自然科学基金KJ2010B119;蚌埠医学院科研课题Byky1205
2013-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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1124-1128
