羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用

摘要：

目的 筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白.方法 用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况.结果 酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2 Ⅰ的不同片段.从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2 Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2 Ⅰ能够特异性结合.亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2 Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集.两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核.结论 人CtBP2能够在细胞核内与UBE2 Ⅰ特异性相互作用,是UBE2 Ⅰ的靶蛋白.

关键词：羧基末端结合蛋白、酵母双杂交、泛素结合酶UBE2 Ⅰ、免疫共沉淀、亚细胞共定位

所属期刊栏目：33

分类号：R394-33;R394.3

资助基金：广东省卫生厅医学科研基金B2009192;广东医学院科研基金B2009010

在线出版日期：2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1783-1788