TLR4/MyD88信号通路在树突状细胞-肾癌786-0细胞株融合瘤苗中的作用

摘要：

目的 探讨TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)信号通路在树突状细胞(dentric cell,DC)-肾癌786-0细胞融合瘤苗中的变化及作用.方法 用正常人外周血诱导不成熟的树突状细胞(immature dentric cell,imDC),利用聚乙二醇法(PEG)制成imDC-肾癌-786-0细胞融合瘤苗；用透射电镜观察imDC融合前后变化情况；RT-PCR检测单纯imDC组,肾癌786-0细胞组,imDC-肾癌-786-0融合瘤苗组在6、12、24、48 h中TLR4及MyD88 mRNA变化情况；用激光共聚焦检测imDC中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在融合前后转位情况；流式细胞仪检测imDC在融合前后CD86、HLA-DR变化；噻唑盐(MTT)法检测各组体外刺激T淋巴细胞的增殖能力及刺激的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的杀瘤活性.结果 透射电镜显示融合细胞中imDC转变为mDC;TLR4及MyD88 mRNA在肾癌中不表达,在单纯imDC中呈低表达(TLR4/β-actin灰度比值0.40±0.03,MyD88/GAPDH灰度比值0.33±0.03),在融合瘤苗组中6h表达最强(TLR4/β-a1ctin灰度比值0.73±0.18,MyD88/GAPDH灰度比值为0.45±0.18),明显强于各组(P＜0.05),此后在融合细胞中逐渐减弱,48 h基本不表达；激光共聚焦显示NF-κB在融合前位于imDC细胞质,融合后转移至细胞核；流式细胞仪提示融合瘤苗HLA-DR、CD86表达分别为81%、80%,明显高于imDC组(63%、59%)及肾癌细胞组(P ＜0.05)；MTT法示融合疫苗在体外刺激T淋巴细胞增殖能力[D(570)值(1.95±0.22)]强于imDC组(1.31±0.35)及肾癌786-0组(1.28±0.33) (P＜0.05),并且其诱导产生的CTLs对自体肾癌细胞具有显著的杀伤活性.结论TLR4/MyD88-NF-κB信号通路在imDC与肾癌786-0细胞融合过程中促使树突状细胞成熟发挥了非常重要的作用,并且此信号通路能促使树突状细胞功能发生转变.

关键词：TOLL样受体4、树突状细胞、肾癌、融合瘤苗、核转录因子、半定量RT-PCR

所属期刊栏目：33

分类号：R73-35;R730.23;R737-11(肿瘤学)

在线出版日期：2011-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1576-1581