利用重叠PCR实现乙肝表面抗原CTL表位的替换

摘要：

目的 以磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(glypican-3,GPC3)的CTL表位EYILSLEEL替换HBsAg中内源性CTL表位LLD,构建用于预防和治疗乙肝的DNA疫苗.方法 以重组表面抗原基因pcHBsAg质粒为模板,应用重延伸PCR扩增出含EYILSLEEL表位的HBsAg基因HBsAg/GPC3,将其插入pBSSK+载体中,构建出pBSSK/GPC3载体.利用DNA重组技术将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,将真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,构建表达CTL表位EYILSLEEL的DNA疫苗.结果 酶切和测序的结果显示序列无错配,获得了完整表达EYILSLEEL表位的真核质粒pcDNA3-HBsAg/GPC3.结论 成功将EYILSLEEL表位替换HBsAg的内源性CTL表位,构建了pcDNA3-HBsAg/GPC3真核表达质粒.

关键词：表位替换、磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白、细胞毒T淋巴细胞表位、重叠延伸PCR

所属期刊栏目：31

分类号：R392-33;R392.11;R512.62

资助基金：国家重点基础研究发展规划973计划2007CB512901;广东省自然科学基金06105111;广东省科技攻关计划0700016

在线出版日期：2009-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：589-591