人可溶性TALL-2突变体的原核表达及纯化

摘要：

目的 制备人可溶性(soluble TNF and apoptosisligand-relatedleukocyte-expressedligand 2,sTALL-2)的3种突变体,为寻找sTALL-2的竞争抑性制剂创造条件.方法 采用一步反向PCR,将编码sTALL-2第187位谷氨酰胺(Gln)的核苷酸序列分别置换为丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)的编码序列,测序正确后,亚克隆到原核表达载体pQE-80L;经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目和蛋白,进而经Sepha-dex G-75柱层析,获得同源三聚体分子.结果 经一步反向PCR扩增后均得到441bp的DNA片段,测序分析表明分别为sTALL-2第187位谷氨酰胺残基置换为Ser、Asp、Arg的序列,3种突变体蛋白在大肠杆DH5α中获得成功表达,并得以有效纯化.结论 成功制备了sTALL-2的3种突变体蛋白,为进一步探讨sTALL-2结构与功能的关系及寻找基于sTALL-2突变体的抗肿瘤分子奠定了基础.

关键词：sTALL-2、突变体、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：28

分类号：Q503;Q516;Q591.2(一般性问题)

资助基金：第三军医大学校科研和教改项目SG200538

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2346-2348