携带hVEGF121-EGFP融合基因的腺病毒表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

摘要：

目的构建携带人血管内皮细胞生长因子121 (human vascular endothelial growth factor 121, hVEGF121)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)融合基因的腺病毒表达载体,观测其表达.方法以pUC18-hVEGF121质粒中的hVEGF121 cDNA为模板,用PCR法扩增hVEGF121 cDNA片段并去除其终止密码子,将此片段连接到含有EGFP cDNA的pEGFP-n1质粒中,再将融合基因hVEGF121-EGFP克隆到穿梭质粒pDC315中,与腺病毒质粒共同转染293细胞,构建重组腺病毒,并进行滴度测定.用重组腺病毒感染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察荧光强度,并用免疫组化法检测VEGF121在NIH3T3中的表达.结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,病毒滴度为1.2×1010～2.7×1011 pfu/ml.荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的NIH3T3细胞有明显的绿色荧光表达.免疫组化结果也证明VEGF121能在NIH3T3中的表达.结论构建的hVEGF121-EGFP腺病毒表达载体可在真核细胞表达,有可能用于缺血性疾患的基因治疗,并观察外源基因在体内的表达.

关键词：腺病毒载体、血管内皮生长因子、绿色荧光蛋白、基因治疗、NIH3T3细胞

所属期刊栏目：28

分类号：R34;R392.11;R394-33;R394.2(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：军队指令性项目01L060

在线出版日期：2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：315-318