膀胱癌T-24细胞系中细胞角蛋白20的分离纯化及鉴定

摘要：

目的分离纯化细胞角蛋白20(Cytokeratin20, CK20)并加以鉴定,为进一步研制抗CK20单克隆抗体奠定基础.方法培养人膀胱肿瘤T-24细胞系并用免疫组化检测CK20表达,然后大量培养并收集细胞,超声波细胞粉碎后,先用萃取、高速离心、透析等方式进行蛋白初分离,然后利用以DE52为介质的阴离子交换层析分离纯化CK20蛋白,以电泳示踪,最后采用SDS-PAGE、HLPC和Western-blotting加以鉴定.结果在阴离子交换层析时出现3组洗脱峰,CK20主要存在第二组峰中,该峰在SDS-PAGE和Western-blotting上均呈现单一条带,HLPC分析显示CK20蛋白主峰呈正态分布,仅见一个较低峰度的蛋白质杂峰.结论该纯化方法简便、可行、效果好、获得的蛋白纯度高,提取的蛋白可确认为CK20 并且具有较高的免疫生物活性.

关键词：细胞角蛋白20、分离纯化、阴离子交换层析、人类膀胱癌T-24细胞

所属期刊栏目：27

分类号：Q503;Q512.6;R392-33(一般性问题)

资助基金：重庆市医学科技计划2003-2-078

在线出版日期：2005-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：302-305