斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

摘要：

目的获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽,对其免疫反应性作初步研究,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础.方法用PCR法扩增目的基因片段,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPoint T载体相连,并导入到大肠杆菌JM109菌株中去,诱导表达其编码的多肽片段.用裂解液制备抗原标本,经SDS-PAGE电泳后,经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况,Westernblotting鉴定其免疫反应性.结果转化实验共获得8株阳性重组子,经测序鉴定证实仅1株正向连接.经过诱导表达,制备重组抗原标本,经SDS-PAGE、转膜后生物素-链亲和素-碱性磷酸酶系统染色显示在32×103处有一融合蛋白条带,反向连接菌株与之相似,也出现一条表达带,但分子量远小于预期值,仅仅14×103左右.Western-blotting显示仅正向连接菌株在32×103的位置有一阳性染色条带.结论成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体,经过诱导后表达的重组抗原,具有良好的免疫反应性.

关键词：斯氏狸殖吸虫、融合蛋白、半胱氨酸蛋白酶

所属期刊栏目：26

分类号：R383.2;Q556.9;Q786(医学寄生虫学)

在线出版日期：2004-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：720-723