丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶hFIST/HIPK2的表达纯化磷酸化

摘要：

目的观察一个新近克隆的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶hFIST/HIPK2 (Human Fas interacting signal transducer/homeo-domain interacting protein kinase) 的表达、纯化、磷酸化.方法用瞬时转染技术、Western blotting 检测hFIST/HIPK2野生型及其变异型蛋白(点突变型hFIST/HIPK2 K221A,C-端缺失型hFIST/HIPK2△C、N-端缺失型hFIST/HIPK2△N)在293T细胞中的表达、磷酸化,及从E.coli中纯化GST-hFIST/HIPK2 △C融合蛋白. 结果 hFIST/HIPK2全长序列cDNA长4 kb, 编码分子质量为130×103的hFIST/HIPK2蛋白;hFIST/HIPK2 K221A的分子质量略小于hFIST/HIPK2野生型,hFIST/HIPK2△C、hFIST/HIPK2△N的分子质量分别为59×103、69×103.hFIST/HIPK2野生型及其变异型蛋白的丝氨酸残基可自我磷酸化,其苏氨酸、酪氨酸残基不被磷酸化;hFIST/HIPK2 蛋白可自我降解,尤以hFIST/HIPK2 K221A蛋白最为明显;从E. coli中纯化了一个分子质量为84×103的GST-hFIST/HIPK2 △C融合蛋白.hFIST/HIPK2与小鼠HIPK2、仓鼠PKM具有高度的同源性,分别为96.1%、96.5%.结论 hFIST/HIPK2为一新的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是DYRK激酶分支家族中的一员,也是新近发现的核蛋白激酶HIPKs (Homeodomain interacting protein kinases)家族中的一员,在发育、凋亡、内环境稳定中发挥重要作用.

关键词：hFIST/HIPK2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、信号转导

所属期刊栏目：25

分类号：R345.5+7;R394.3(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2003-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1262-1265