斑马鱼Notch信号通路配体基因delta-like 4对smad基因的调控作用

摘要：

为研究斑马鱼(Danio rerio)的 Notch 信号通路配体 delta-like 4(dll4)对 smad 基因(smad1 和smad7)的调控作用,利用qRT-PCR方法检测受精后 2 d(day post fertilization,dpf)的斑马鱼dll4 纯合突变体smad家族中smad1和smad7的表达变化,利用生物信息学软件预测smad1 和smad7 启动子序列的转录结合位点和CpG岛;采用同源重组的方法,构建p3×Flag-CMV-dll4 真核表达载体及pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc报告基因载体,并通过双荧光素酶试验检测dll4 对smad1 和smad7 的调控活性;分别转染两种启动子报告基因载体到HEK293T细胞,共转染启动子报告基因载体与真核表达载体到HEK293T细胞.结果表明:dll4 纯合突变体斑马鱼中smad1 和smad7 表达量均显著下调(P<0.000 1);两种基因启动子均包含HNF-3、GATA-1和Oct-1等转录因子结合位点,只有smad7 启动子存在CpG岛;报告基因pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的活性分别为对照组的 7.3 倍和 142.7 倍,两种报告基因与p3×Flag-CMV-dll4 表达载体共转后,转录活性均升高,分别为对照组的 2.8 倍和2.2 倍,说明p3×Flag-CMV-dll4 可以促进pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的转录表达活性.研究表明,斑马鱼Notch信号通路配体基因dll4 可通过smad基因家族在血管生成中发挥调控作用,为损伤血管的修复和肿瘤血管生成提供特异的生物学靶点.

关键词：斑马鱼、Notch信号通路配体、delta-like4、smad1、smad7、双荧光素酶报告基因

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分类号：S917.4;Q71(水产基础科学)

资助基金：国家重点研发计划;教育部留学回国人员科研启动基金;水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设;前沿科学研究项目

在线出版日期：2023-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：76-85