中间球海胆smad2/3基因克隆、组织表达及其脂多糖刺激响应

摘要：

为明确中间球海胆 Strongylocentrotus intermedius smad2/3基因 (命名为Si-smad2/3) 信息, 初步研究了该基因的序列特征、组织表达模式及脂多糖对其表达的影响, 采用RACE技术克隆获得了成体中间球海胆Si-smad2/3基因的全长cDNA序列.结果表明: Si-smad2/3基因的cDNA全长为2146 bp, 共编码446个氨基酸; 生物信息学分析发现, Si-smad2/3基因所编码的蛋白相对分子质量为50 300, 等电点为6.93,属于亲水性非跨膜蛋白; 通过与9种已公布物种的smad2/3蛋白氨基酸序列进行多重序列比对和系统进化分析发现, 中间球海胆Si-smad2/3蛋白的氨基酸序列与其他真核生物smad2/3蛋白序列具有较高的相似性, 与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus smad2/3蛋白的一致性高达96%, 符合中间球海胆的分类和进化地位; 实时定量PCR (qRT-PCR) 检测结果显示, Si-smad2/3基因在中间球海胆不同组织中均有表达,其相对表达量从高到低为体腔细胞>管足>性腺>围口膜>肠>齿间肌; 利用脂多糖 (LPS, 0.1 mg/mL) 对中间球海胆进行免疫刺激发现, 与对照组相比, LPS刺激后Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞、管足和围口膜中均呈先升高后降低的表达趋势, 其中, Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞中的相对表达量在LPS刺激9 h时达到峰值, 管足中表达量在LPS刺激6 h时达到峰值, 而围口膜中的表达量在LPS刺激72 h时达到峰值.研究表明, Si-smad2/3可能参与中间球海胆的免疫应答过程且免疫响应具有组织特异性.

关键词：中间球海胆、smad2/3基因、克隆、表达模式、生物功能

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分类号：S968.9;Q786(水产养殖技术)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31672652;农业部农业科研人才及其创新团队项目

在线出版日期：2019-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：345-354