TRPV1基因的shRNA逆转录病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的：构建针对人瞬态电压感受器阳离子通道，子类V，成员1(TRPV1)基因的pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒表达载体，感染U87-MG细胞，观测其沉默TRPV1基因的效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人TRPV1基因的shRNA干扰序列，克隆到pSUPERretro-puro载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用磷酸钙法制备pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒，将其感染到U87-MG细胞，经嘌呤酶素筛选阳性克隆后采用荧光定量PCR及Western blotting法检测TRPV1表达。结果经DNA测序和酶切鉴定表明，pSUPERretro-puro TRPV1表达载体构建成功。pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后，细胞中TRPV1表达量明显降低。结论成功构建了针对人TRPV1基因的pSUPERretro-puro TRPV1表达载体。pSUPERretro-puro TRPV1能有效下调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达，为将来应用其研究TRPV1在利多卡因致细胞损伤中的作用奠定了基础。

关键词：瞬态电压感受器阳离子通道、利多卡因、逆转录病毒

所属期刊栏目：22

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金81260176

在线出版日期：2016-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-3,4