大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化

摘要：

研究发现GmeEF1A与大豆花叶病毒的P3蛋白存在互作关系,并且参与SMV在大豆体内的繁殖.通过大豆GmeEF1A基因5个拷贝的核苷酸和氨基酸序列比对,确定其保守区间,克隆得到180 bp的干扰片段GmeEF1Ai.利用GATEWAY技术构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体pB7GWIWG2 (Ⅱ)-eEF1 Ai,并通过农杆菌介导的子叶节转化法导入到受体大豆品种天隆1号中.测序结果显示重组质粒中插入的干扰片段GmeEF1Ai与目标序列完全符合,通过PCR和酶切验证表明GmeEF1 Ai是以反向重复形式插入到表达载体中.经转化获得组培苗8株,PCR、除草剂涂抹和PAT/bar试纸条多重检测确认7株为阳性.绝对荧光定量结果显示,阳性苗中4株为单拷贝.GmeEF1A基因表达量分析结果显示GmeEF1Ai载体对GmeEF1A的5个拷贝基因有不同程度的阻抑.这不仅为验证GmeEF 1A基因在大豆受SMV侵染时的功能提供试验材料,也为大豆抗病育种提供新的种质.

关键词：大豆花叶病毒、GmeEF1A基因、RNAi、GATEWAY技术、农杆菌介导大豆遗传转化

所属期刊栏目：35

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2008ZX08004-004;国家自然科学基金31371646,31571690;国家现代农业产业技术体系CARS-004;江苏省现代作物生产协同创新中心JCIC-MCP.

在线出版日期：2016-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：902-910