多拷贝脂肪酶基因在黑曲霉中表达研究

摘要：

文章在使用含6个glaA box强启动子PglaA6R和高效分泌信号肽SglaA调控黑曲霉脂肪酶基因AnlipA表达基础上,用pyrG双向筛选标记,应用多拷贝黑曲霉脂肪酶基因策略,构建含1个拷贝AnlipA基因表达载体pSZHA6R-AnlipA和含2个拷贝AnlipA基因表达载体pSZHA6R-2AnlipA,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462(△pyrG△asAA∷pyrG),获得asAA基因位点整合纯合同源重组转化子CICC2462 (pSZHA6R-AnlipA)和CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA).重组菌株经摇瓶发酵后,作荧光定量PCR、SDS-PAGE和脂肪酶活力检测.结果表明,重组菌株可分泌表达约37.0 ku目的蛋白条带,CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)中脂肪酶表达在mRNA水平和酶活水平皆高于CICC2462 (pSZHA6R-AnlipA).发酵第5天CICC2462 (pSZHA6R-2AnlipA)中AnlipA基因转录水平为CICC2462(pSZHA6R-AnlipA) 1.26倍.二者酶活力在发酵第8天达峰值,此时CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)是CICC2462(pSZHA6R-AnlipA) 1.32倍,酶活力达1 480 U·mL-1.对重组菌株CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)第8天发酵液作酶学性质分析,结果表明,最适温度为35℃,最适pH为6.0.获得1株高效分泌表达脂肪酶食品级黑曲霉工程菌.

关键词：脂肪酶、多拷贝、分泌表达、黑曲霉

所属期刊栏目：49

分类号：Q815(生物工程学(生物技术))

资助基金：黑龙江省应用技术研究与开发计划重大项目GA15B203

在线出版日期：2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：49-58