肇东盐单胞菌中胞苷酸激酶基因cmk的克隆与功能分析

摘要：

为探究一株中度嗜盐菌一肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒pUC-LYS1.该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 mol·L-1 NaC1的LBK培养基上生长.序列分析显示,重组质粒pUC-LYS1中外源DNA片段由1个N端截短的ORF1、三个完整的ORF(ORF2-4)以及1个C端截短的ORF5组成.其中,ORF4与伸长盐单胞菌(Halomonas enlongata)中1个推测的胞苷酸激酶(Cytidylate kinase,CMK)同源性最高(86％).为便于区分与其同源物,编码ORF4的基因cmk来自肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)被定名为Hz_cmk.Hz_CMK也与包括已被鉴定来自大肠杆菌(E.coli)的Ec_CMK等其他同源物具有较高同源性.为进一步鉴定Hz_cmk是否编码胞苷酸激酶,通过PCR扩增分别将Hz_cmk和大肠杆菌(E.coli)的同源基因Ec_cmk(作为正对照)构建至原核表达载体pET19,转化到大肠杆菌(E.coli)C41(DE3)感受态细胞中诱导表达.SDS-PAGE表明其以可溶形式存在.酶学分析表明Hz_CMK与Ec_CMK均具有较高胞苷酸激酶活性.为国内外首次中度嗜盐菌的胞苷酸激酶基因功能鉴定.

关键词：肇东盐单胞菌、胞苷酸激酶(CMK)、原核表达、酶活性

所属期刊栏目：48

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31570045;黑龙江省自然科学基金面上项目C201417;黑龙江省博士后科研启动金LBH-Q14022

在线出版日期：2017-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：33-40