10.3969/j.issn.1005-9369.2016.06.009
牛eIF5基因原核表达与蛋白纯化
研究应用PCR方法扩增牛eIF5基因编码序列,通过Eco R Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-1载体,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-eIF5,并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定正确后,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5构建成功,Western Blot证实融合蛋白大量表达,纯化后获得GST-eIF5融合蛋白,为深入研究牛eIF5蛋白功能奠定基础。
牛、eIF5、克隆、原核表达、纯化
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S823;Q785(家畜)
国家高技术研究发展计划863项目2013AA102504-03
2016-07-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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