野生型枯草芽孢杆菌N4的spizizen转化法优化

摘要：

采用经典Spizizen方法将已构建的大片段重组质粒pHT01-nit（nit为腈水解酶基因）转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4，无法获得转化子。研究对Spizizen方法进行改进，分别在感受态制备及转化过程中加入有机溶剂及溶菌酶，并对有机溶剂种类、浓度，溶菌酶浓度，质粒与感受态共培养时间进行优化，提高转化效率，构建Bacillus subtilis N4-pHT01-nit。经IPTG诱导，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacryamide gel electro?phoresis, PAGE）验证nit在野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4中的表达。结果表明，最优条件为在感受态制备过程中添加4%的Tween-80，转化过程中添加5μg·mL-1溶菌酶，感受态与质粒共培养时间为1 h，条件优化后可得到37个转化子·μg-1 DNA。在SDS-PAGE上可以看到与腈水解酶分子质量一致的蛋白条带。说明该优化后的方法效果明显，适合于大片段重组质粒转化野生型枯草芽孢杆菌。

关键词：野生型枯草芽孢杆菌、spizizen转化法、有机溶剂、溶菌酶、SDS-PAGE

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目41271504

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：78-82,108