10.3969/j.issn.1005-9369.2015.02.012
野生型枯草芽孢杆菌N4的spizizen转化法优化
采用经典Spizizen方法将已构建的大片段重组质粒pHT01-nit(nit为腈水解酶基因)转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4,无法获得转化子。研究对Spizizen方法进行改进,分别在感受态制备及转化过程中加入有机溶剂及溶菌酶,并对有机溶剂种类、浓度,溶菌酶浓度,质粒与感受态共培养时间进行优化,提高转化效率,构建Bacillus subtilis N4-pHT01-nit。经IPTG诱导,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacryamide gel electro?phoresis, PAGE)验证nit在野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4中的表达。结果表明,最优条件为在感受态制备过程中添加4%的Tween-80,转化过程中添加5μg·mL-1溶菌酶,感受态与质粒共培养时间为1 h,条件优化后可得到37个转化子·μg-1 DNA。在SDS-PAGE上可以看到与腈水解酶分子质量一致的蛋白条带。说明该优化后的方法效果明显,适合于大片段重组质粒转化野生型枯草芽孢杆菌。
野生型枯草芽孢杆菌、spizizen转化法、有机溶剂、溶菌酶、SDS-PAGE
Q785(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金资助项目41271504
2015-03-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
78-82,108