10.3969/j.issn.1005-9369.2015.02.004
鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
试验参考GenBank上鸡氨肽酶N(gAPN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆gAPN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2906 bp的全长基因。利用原核表达载体pET-30a(+)构建重组质粒pET-gAPN并转化E. coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化gAPN重组蛋白为免疫原制备兔抗gAPN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然gAPN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pcDNA-gAPN转染HELA细胞所表达的gAPN蛋白。上述结果可为gAPN蛋白的深入研究奠定基础。
鸡氨肽酶N、多克隆抗体、免疫印迹、间接免疫荧光
S852.23(动物医学(兽医学))
国家自然科学基金项目31172295,31272569;黑龙江省自然科学基金项目ZJN0702-01
2015-03-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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