鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究

摘要：

试验参考GenBank上鸡氨肽酶N（gAPN）基因序列（登录号为NM_204861.1）设计多对特异性引物，利用RT-PCR分段克隆gAPN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接，得到大小为2906 bp的全长基因。利用原核表达载体pET-30a（+）构建重组质粒pET-gAPN并转化E. coli Rosetta，经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化gAPN重组蛋白为免疫原制备兔抗gAPN多克隆抗体，间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明，此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带，同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然gAPN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示，多克隆抗体可检测到pcDNA-gAPN转染HELA细胞所表达的gAPN蛋白。上述结果可为gAPN蛋白的深入研究奠定基础。

关键词：鸡氨肽酶N、多克隆抗体、免疫印迹、间接免疫荧光

分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31172295，31272569；黑龙江省自然科学基金项目ZJN0702-01

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：24-31