双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

摘要：

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒（PEDV）免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒（PEDV）单克隆抗体，建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明，该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为，兔抗PEDV抗体稀释度为1??800包被37℃1 h加4℃12 h，样品反应时间为90 min，酶标抗体工作浓度为1??2000作用45 min，以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%，最低检测限为5×103.67TCID50/mL，并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品，结果显示， ELISA阳性检出率为39.6%，而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点，可用于PEDV快速检测。

关键词：猪流行性腹泻病毒、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA、检测

分类号：S767.5;X172(森林保护学)

资助基金：科技部863计划项目2012AA101304-3；黑龙江省高校科技创新基金2011TD001

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1-10